Wpływ środków anmitotycznych i hormonów na produkcję zielonych roślin podwójnie haploidalnych poprzez hodowlę pylników ryżu japonica z regionu śródziemnomorskiego

Rośliny ryżu o podwójnej haploidalności (DH) uzyskuje się głównie poprzez hodowlę pylników. W celu udoskonalenia protokołu hodowli pylników mikrosporom dwóch genotypów ryżu japonica (NRVC980385 i H28) poddano działaniu trzech kombinacji regulatorów wzrostu oraz czterech zabiegów z użyciem kolchicyny na podłożu indukcyjnym. Ponadto przetestowano procedurę stosowaną po hodowli pylników, wykorzystującą kolchicynę lub oryzalinę, w celu wywołania powstawania sadzonek o podwójnej haploidalności z sadzonek haploidalnych. Wstępna obróbka mikrospor w niskiej temperaturze przez 9 dni w 10 °C zwiększyła indukcję kalusa 50-krotnie w genotypie NRCV980385. W przypadku obu genotypów najlepsze wyniki hodowli dało zastosowanie 2 mg L−1 2,4-D i 1 mg L−1 kinetiny na podłożu indukcyjnym bez kolchicyny. Zdolność do hodowli obu genotypów uległa zmianie na podłożach indukcyjnych z dodatkiem kolchicyny. Odnotowano wysoką zależność od genotypu w przypadku indukcji kalusa, regeneracji zielonych sadzonek z kalusa oraz regeneracji zielonych sadzonek podwójnie haploidalnych. Kolchicyna w stężeniu 300 mg/l przez 48 godzin zwiększyła indukcję kalusa 100-krotnie w genotypie H28. Pożywki uzupełnione kolchicyną wyraźnie poprawiły regenerację zielonych sadzonek podwójnie haploidalnych. Wykazaliśmy, że obróbka haploidalnych sadzonek po hodowli z pylników przy stężeniu kolchicyny wynoszącym 500 mg/l pozwoliła na wyhodowanie płodnych podwójnie haploidalnych sadzonek. Na koniec przetestowano ulepszony protokół cytometrii przepływowej o średniej przepustowości dla ryżu w celu analizy wszystkich sadzonek pochodzących z hodowli z pylników oraz po hodowli z pylników.