Efectele substanțelor antimitotice și hormonale asupra producției de plante dublu haploide verzi prin cultura anterelor la orezul japonica mediteranean

Plantele de orez dublu haploide (DH) sunt obținute în principal prin cultura anterelor. În vederea îmbunătățirii protocolului de cultură a anterelor, microsporii a două genotipuri de orez japonica (NRVC980385 și H28) au fost supuși la trei combinații de regulatori de creștere și la patru tratamente cu colchicină pe mediu de inducție. În plus, a fost testată o procedură post-cultură a anterelor, utilizând colchicină sau orizalină, pentru a induce plantule dublu haploide din plantule haploide. Un pretratament la rece al microsporilor timp de 9 zile la 10 °C a crescut inducerea calusului de 50 de ori la genotipul NRCV980385. Pentru ambele genotipuri, 2 mg L−1 2,4-D și 1 mg L−1 kinetină pe mediu de inducție fără colchicină au dat cele mai bune răspunsuri de cultură. Capacitatea de cultură a ambelor genotipuri s-a modificat pe medii de inducție suplimentate cu colchicină. S-a înregistrat o dependență ridicată de genotip pentru inducerea calusului, regenerarea plantulelor verzi din calus și regenerarea plantulelor verzi dublu-haploide. Colchicina la 300 mg L−1 timp de 48 de ore a sporit inducerea calusului de 100 de ori la H28. Mediile suplimentate cu colchicină au îmbunătățit în mod clar regenerarea plantulelor verzi dublu-haploide. Am demonstrat că tratamentul post-cultură de antere al plantulelor haploide cu 500 mg L−1 de colchicină a permis generarea de plantule dublu haploide fertile. În cele din urmă, a fost testat un protocol îmbunătățit de citometrie în flux cu randament mediu pentru orez, pentru a analiza toate plantulele provenite din cultura de antere și post-antere.