Opracowanie metody RT-PCR w czasie rzeczywistym do szerokospektralnego wykrywania wirusa Grapevine leafroll-associated virus-2 u winorośli

GLRaV-2, należący do rodzaju Closterovirus z rodziny Closteroviridae, jest jednym z pięciu gatunków wirusów odpowiedzialnych za wirusową chorobę zwijania się winorośli. Składa się on z 6 wariantów molekularnych wykazujących do 30% rozbieżności nukleotydowej. Opracowanie testu wykrywającego GLRaV-2 metodą RT-PCR w czasie rzeczywistym wymagało zaprojektowania specyficznych i uniwersalnych starterów dla tych różnych wariantów. Metodę tę zweryfikowano na międzynarodowym panelu 85 próbek winorośli, z których 10 dało wynik negatywny w teście ELISA, a pozytywny w nowej metodzie. Stwierdzono 125-krotny wzrost czułości RT-PCR w czasie rzeczywistym w porównaniu z klasyczną metodą RT-PCR, a jej zastosowanie do wykrywania GLRaV-2 w podkładkach wykazało jej przewagę, szczególnie na poziomie korzeni.