De invloed van antimitotica en hormonen op de productie van groene dubbelhaploïde planten via anthercultuur van mediterrane japonica-rijst

Dubbelhaploïde (DH) rijstplanten worden voornamelijk geproduceerd via anthercultuur. Om het protocol voor anthercultuur te verbeteren, werden microsporen van twee japonica-rijstgenotypes (NRVC980385 en H28) op inductiemedium onderworpen aan drie combinaties van groeiregulatoren en vier colchicinebehandelingen. Daarnaast werd een procedure na de anthercultuur getest, waarbij colchicine of oryzaline werd gebruikt om dubbelhaploïde plantjes te induceren uit haploïde plantjes. Een koude voorbehandeling van microsporen gedurende 9 dagen bij 10 °C verhoogde de callusinductie 50-voudig in het NRCV980385-genotype. Voor beide genotypen gaven 2 mg L−1 2,4-D en 1 mg L−1 kinetine op colchicinevrij inductiemedium de beste kweekresultaten. De kweekbaarheid van beide genotypen veranderde op met colchicine aangevulde inductiemedia. Er werd een hoge genotypeafhankelijkheid vastgesteld voor callusinductie, de regeneratie van groene plantjes uit callus en de regeneratie van groene dubbelhaploïde plantjes. Colchicine in een concentratie van 300 mg L−1 gedurende 48 uur versterkte de callusinductie bij H28 met een factor 100. Met colchicine aangevulde media verbeterden duidelijk de regeneratie van groene dubbelhaploïde plantjes. We toonden aan dat de behandeling van haploïde plantjes na de anthercultuur met 500 mg L−1 colchicine het mogelijk maakte vruchtbare dubbelhaploïde plantjes te genereren. Ten slotte werd een verbeterd protocol voor flowcytometrie met gemiddelde doorvoer voor rijst getest om alle plantjes uit de anther- en post-anthercultuur te analyseren.