Vývoj a validácia metód qPCR na kvantifikáciu Nosema apis, Nosema ceranae a Nosema bombi u včiel

V tejto štúdii sa vyvíjajú a validujú špecifické, citlivé a presné metódy qPCR v reálnom čase založené na sondách na detekciu a kvantifikáciu troch kľúčových mikrosporídií infikujúcich včely – Nosema apis, Nosema ceranae a Nosema bombi – u medonosných včiel (Apis mellifera), čmeľov (Bombus terrestris) a murárskych včiel (Osmia bicornis). Tieto testy, zamerané na jednokópiový, vysoko konzervovaný gén RPB1, dosahujú vysokú účinnosť (95–110 %), nízku variabilitu a detekčné limity v rozmedzí 2,0 až 4,0 log10 kópií na včelu. Tieto metódy preukazujú špecifickosť, komplexnosť a spoľahlivosť u všetkých troch druhov včiel, pričom u medonosných včiel boli validované kvantifikačné rozsahy od 4 do 10,3 log10 kópií na včelu. Systematické odchýlky v surových hodnotách Cq boli korigované, čím sa výrazne zlepšila presnosť a správnosť výsledkov, čím sa splnili požiadavky francúzskej normy na správnosť a reprodukovateľnosť. Tento prístup prekonáva obmedzenia génov rRNA s viacerými kópiami použitím cieľov s jednou kópiou, čím zvyšuje spoľahlivosť diagnostiky. Metódy sú vhodné pre vysokokapacitné skríningové testovanie a podporujú výskum koinfekcií vírusmi a inými patogénmi, čo umožňuje lepšie posúdenie dynamiky parazitov a zdravotných rizík pre včely. Štúdia poskytuje harmonizovaný a validovaný súbor molekulárnych nástrojov na monitorovanie a ekologické štúdie nosemózy u chovaných a voľne žijúcich opeľovačov.