Efeitos antimitóticos e hormonais na produção de plantas duplamente haplóides verdes através da cultura de anteras de arroz japonica mediterrânico

As plantas de arroz duplamente haplóides (DH) são produzidas principalmente através da cultura de anteras. Com o objetivo de melhorar o protocolo de cultura de anteras, os micrósporos de dois genótipos de arroz japonica (NRVC980385 e H28) foram submetidos a três combinações de reguladores de crescimento e a quatro tratamentos com colchicina num meio de indução. Além disso, foi testado um procedimento pós-cultura de anteras utilizando colchicina ou orizalina para induzir plântulas duplamente haplóides a partir de plântulas haplóides. Um pré-tratamento a frio das micrósporas durante 9 dias a 10 °C aumentou a indução de calo 50 vezes no genótipo NRCV980385. Para ambos os genótipos, 2 mg L−1 de 2,4-D e 1 mg L−1 de cinetina em meio de indução sem colchicina proporcionaram as melhores respostas de cultura. A capacidade de cultura de ambos os genótipos alterou-se em meios de indução suplementados com colchicina. Foi registada uma elevada dependência do genótipo para a indução de calo, a regeneração de plântulas verdes a partir do calo e a regeneração de plântulas verdes duplamente haplóides. A colchicina a 300 mg L−1 durante 48 h aumentou a indução de calo 100 vezes no H28. Os meios suplementados com colchicina melhoraram claramente a regeneração de plântulas verdes duplamente haplóides. Demonstrámos que o tratamento de cultura pós-antera de plântulas haplóides com 500 mg L−1 de colchicina permitiu a geração de plântulas duplamente haplóides férteis. Por fim, foi testado um protocolo melhorado de citometria de fluxo de rendimento médio para o arroz, a fim de analisar todas as plântulas provenientes da cultura de antera e pós-antera.