Effetti antimitotici e ormonali sulla produzione di piante doppie aploidi verdi mediante coltura di antere di riso japonica mediterraneo

Le piante di riso doppio aploide (DH) vengono prodotte principalmente tramite coltura di antere. Al fine di migliorare il protocollo di coltura delle antere, le microspore di due genotipi di riso japonica (NRVC980385 e H28) sono state sottoposte a tre combinazioni di regolatori di crescita e a quattro trattamenti con colchicina su terreno di induzione. Inoltre, è stata testata una procedura post-coltura delle antere che utilizzava colchicina o orizalina per indurre piantine doppio aploidi da piantine aploidi. Un pretrattamento a freddo delle microspore per 9 giorni a 10 °C ha aumentato di 50 volte l'induzione del callo nel genotipo NRCV980385. Per entrambi i genotipi, 2 mg L−1 di 2,4-D e 1 mg L−1 di kinetina su un terreno di induzione privo di colchicina hanno dato le migliori risposte di coltura. La coltivabilità di entrambi i genotipi è cambiata su terreni di induzione integrati con colchicina. È stata registrata un'elevata dipendenza dal genotipo per l'induzione del callo, la rigenerazione di piantine verdi dal callo e la rigenerazione di piantine verdi diploidi. La colchicina a 300 mg L−1 per 48 ore ha potenziato l'induzione del callo di 100 volte in H28. I terreni integrati con colchicina hanno chiaramente migliorato la rigenerazione di piantine verdi diploidi. Abbiamo dimostrato che il trattamento post-coltura dell'antera delle piantine aploidi con 500 mg L−1 di colchicina ha permesso di generare piantine diploidi fertili. Infine, è stato testato un protocollo migliorato di citometria a flusso a media produttività per il riso per analizzare tutte le piantine provenienti dalla coltura dell'antera e post-antera.