Effets des agents antimitotiques et des hormones sur la production de plants double haploïdes verts par culture d'anthères de riz japonica méditerranéen

Les plants de riz double haploïde (DH) sont principalement produits par culture d'anthères. Afin d'améliorer le protocole de culture d'anthères, des microspores issues de deux génotypes de riz japonica (NRVC980385 et H28) ont été soumises à trois combinaisons de régulateurs de croissance et à quatre traitements à la colchicine sur un milieu d'induction. De plus, une procédure post-culture d'anthères utilisant de la colchicine ou de l'oryzaline a été testée pour induire des plantules double haploïdes à partir de plantules haploïdes. Un prétraitement à froid des microspores pendant 9 jours à 10 °C a multiplié par 50 l'induction de callosités chez le génotype NRCV980385. Pour les deux génotypes, 2 mg L−1 de 2,4-D et 1 mg L−1 de kinétine sur un milieu d'induction sans colchicine ont donné les meilleures réponses de culture. La cultivabilité des deux génotypes a varié sur des milieux d'induction enrichis en colchicine. Une forte dépendance au génotype a été observée pour l'induction de callosités, la régénération de plantules vertes à partir de callosités et la régénération de plantules vertes doublement haploïdes. Une concentration de 300 mg L−1 de colchicine pendant 48 h a multiplié par 100 l'induction de callosités chez H28. Les milieux enrichis en colchicine ont clairement amélioré la régénération de plantules vertes doublement haploïdes. Nous avons montré que le traitement post-culture d'anthères des plantules haploïdes à 500 mg L−1 de colchicine permettait de générer des plantules doublement haploïdes fertiles. Enfin, un protocole amélioré de cytométrie en flux à débit moyen pour le riz a été testé afin d'analyser toutes les plantules issues de la culture d'anthères et de la culture post-anthères.