Antimitotisten aineiden ja hormonien vaikutukset vihreiden kaksoishaploidien tuotantoon Välimeren japonica-riisin heteiden viljelyn avulla

Riisin kaksoishaploideja (DH) kasvatetaan pääasiassa siitepölyviljelyn avulla. Siitepölyviljelymenetelmän parantamiseksi kahden japonica-riisigenotyypin (NRVC980385 ja H28) mikrosporit altistettiin kolmelle kasvun säätelijöiden yhdistelmälle ja neljälle kolkisiinikäsittelylle induktioväliaineessa. Lisäksi testattiin siitepölyviljelyn jälkeistä menetelmää, jossa käytettiin kolkisiinia tai oryzaliinia kaksoishaploidien taimien indusoimiseksi haploideista taimista. Mikrosporien 9 päivän kylmäesikäsittely 10 °C:ssa lisäsi kalluksen induktiota 50-kertaisesti NRCV980385-genotyypissä. Molemmille genotyypeille 2 mg L−1 2,4-D ja 1 mg L−1 kinetiniä kolkisiinittomalla induktioväliaineella antoivat parhaat viljelytulokset. Molempien genotyyppien viljeltävyys muuttui kolkisiinilla täydennetyillä induktioväliaineilla. Kalluksen induktiossa, kalluksesta regeneroituvissa vihreissä taimissa ja vihreiden kaksoishaploidi-taimien regeneroinnissa havaittiin voimakasta genotyyppiriippuvuutta. 300 mg L−1:n pitoisuus kolkisiinia 48 tunnin ajan paransi kalluksen induktiota 100-kertaisesti genotyypissä H28. Kolkisiinilla täydennetyt väliaineet paransivat selvästi vihreiden kaksoishaploidi-taimien regenerointia. Osoitimme, että haploidi-taimien heteiden jälkeinen viljelykäsittely 500 mg L−1:n kolkisiinipitoisuudella mahdollisti hedelmällisten kaksoishaploidi-taimien tuottamisen. Lopuksi testattiin riisille kehitettyä parannettua keskisuurikapasiteettista virtaussytometriaprotokollaa kaikkien heteistä ja heteiden jälkeisestä viljelystä peräisin olevien taimien analysoimiseksi.