Desarrollo y validación de métodos de qPCR para la cuantificación de Nosema apis, Nosema ceranae y Nosema bombi en las abejas

Este estudio desarrolla y valida métodos de qPCR en tiempo real basados en sondas, específicos, sensibles y precisos, para la detección y cuantificación de tres microsporidios clave que infectan a las abejas: Nosema apis, Nosema ceranae y Nosema bombi— en abejas melíferas (Apis mellifera), abejorros (Bombus terrestris) y abejas albañiles (Osmia bicornis). Al dirigirse al gen RPB1, de copia única y altamente conservado, los ensayos alcanzan una alta eficiencia (95-110 %), una baja variabilidad y límites de detección de entre 2,0 y 4,0 log10 copias por abeja. Los métodos demuestran especificidad, exhaustividad y solidez en las tres especies de abejas, con rangos de cuantificación validados de 4 a 10,3 log10 copias/abeja en las abejas melíferas. Se corrigieron los sesgos sistemáticos en los valores Cq brutos, lo que mejoró significativamente la exactitud y la precisión, cumpliendo los requisitos de la norma francesa en materia de veracidad y reproducibilidad. Este enfoque supera las limitaciones de los genes de ARN ribosómico (rRNA) multicopia mediante el uso de dianas de copia única, lo que mejora la fiabilidad diagnóstica. Los métodos son adecuados para el cribado de alto rendimiento y respaldan la investigación sobre coinfecciones con virus y otros patógenos, lo que permite una mejor evaluación de la dinámica de los parásitos y de los riesgos para la salud de las abejas. El estudio proporciona un conjunto de herramientas moleculares armonizadas y validadas para la vigilancia y los estudios ecológicos de la nosemosis en polinizadores domesticados y silvestres.