Efectos antimitóticos y hormonales en la producción de plantas doble haploides verdes mediante el cultivo de anteras de arroz japonica mediterráneo

Las plantas de arroz doble haploide (DH) se producen principalmente mediante cultivo de anteras. Con el fin de mejorar el protocolo de cultivo de anteras, se sometieron microsporas de dos genotipos de arroz japónica (NRVC980385 y H28) a tres combinaciones de reguladores del crecimiento y cuatro tratamientos con colchicina en medio de inducción. Además, se probó un procedimiento posterior al cultivo de anteras utilizando colchicina u orizalina para inducir plántulas doble haploides a partir de plántulas haploides. Un pretratamiento en frío de las microesporas durante 9 días a 10 °C aumentó la inducción de callos 50 veces en el genotipo NRCV980385. Para ambos genotipos, 2 mg L−1 de 2,4-D y 1 mg L−1 de cinetina en un medio de inducción sin colchicina dieron las mejores respuestas de cultivo. La cultivabilidad de ambos genotipos varió en los medios de inducción suplementados con colchicina. Se observó una alta dependencia del genotipo en la inducción de callos, la regeneración de plántulas verdes a partir de callos y la regeneración de plántulas verdes diploides. La colchicina a 300 mg L−1 durante 48 h potenció la inducción de callos 100 veces en H28. Los medios suplementados con colchicina mejoraron claramente la regeneración de plántulas verdes diploides. Demostramos que el tratamiento de cultivo posanteral de plántulas haploides con 500 mg L−1 de colchicina permitió generar plántulas diploides fértiles. Por último, se probó un protocolo mejorado de citometría de flujo de rendimiento medio para el arroz con el fin de analizar todas las plántulas procedentes del cultivo anteral y posanteral.