Разработване и валидиране на qPCR методи за количествено определяне на Nosema apis, Nosema ceranae и Nosema bombi при пчелите

В настоящото проучване се разработват и валидират специфични, чувствителни и точни методи за qPCR в реално време, базирани на сонди, за откриване и количествено определяне на три основни микроспоридии, заразяващи пчелите — Nosema apis, Nosema ceranae и Nosema bombi — при медоносните пчели (Apis mellifera), земните пчели (Bombus terrestris) и зидарските пчели (Osmia bicornis). Насочени към еднокопийния, силно консервиран ген RPB1, тестовете постигат висока ефективност (95–110%), ниска вариабилност и граници на откриване между 2,0 и 4,0 log10 копия на пчела. Методите демонстрират специфичност, изчерпателност и надеждност при всичките три вида пчели, като валидираните диапазони за количествено определяне при медоносните пчели варират от 4 до 10,3 log10 копия/пчела. Систематичните отклонения в суровите Cq стойности бяха коригирани, което значително подобри точността и прецизността, като отговаря на изискванията на френските стандарти за верност и възпроизводимост. Подходът преодолява ограниченията на многокопийните rRNA гени чрез използване на еднокопийни мишени, което повишава надеждността на диагностиката. Методите са подходящи за скрининг с висока производителност и подпомагат изследванията върху коинфекции с вируси и други патогени, като позволяват по-добра оценка на динамиката на паразитите и рисковете за здравето на пчелите. Проучването предоставя хармонизиран и валидиран набор от молекулярни инструменти за наблюдение и екологични изследвания на ноземозата при отглеждани и диви опрашители.